In vivo, proof of this concept has proven to be more challenging. In one study, mice were injected with influenza virus-infected apoptotic 3T3 cells, and this led to T cell activation directed against influenza virus antigen126. However, a direct a link between DC efferocytosis-mediated cross-presentation and protective antipathogen adaptive immunity in an actual infectious setting was not shown. This critical link was finally established following the discovery of a cell-surface protein complex on CD8α+ DCs, comprising AXL, LRP1 and RAN-binding protein 9 (RANBP9), that binds and internalizes HSV-1-infected ACs in a manner that leads to cross-presentation of AC-derived viral antigens to CD8+ T cells127 (Fig. 3d). AXL was necessary for AC binding, LRP1 promoted AC internalization via its interaction with the RAC GTP adaptor GULP1 and RANBP9 facilitated the functional interaction between AXL and LRP1. Genetic targeting of any of these molecules on DCs in mice infected with HSV-1 leads to accumulation of infected ACs, impaired activation of splenic CD8+ T cells directed against HSV-1 antigen, increased viral load and decreased mouse survival127. As these DC-targeted gene knockouts do not affect HSV-1 infectivity itself, the data provide direct molecular-genetic causation evidence linking DC efferocytosis of infected ACs with cross-presentation of antigen and adaptive immunity in pathogen-infected mice.

In vivo, a prova deste conceito provou ser mais desafios. Em um estudo, camundongos foram injetados com células apoptóticas 3T3 infectadas com vírus influenza, e isso levou à ativação de células T dirigida contra o antígeno do vírus influenza126. No entanto, um link direto entre DC apresentação cruzada mediada por efferocitose e imunidade adaptativa antipatógeno protetora em um ambiente infeccioso real não foi demonstrada. Este link crítico foi finalmente estabelecido após a descoberta de um complexo de proteína de superfície celular em CD8α + DCs, compreendendo AXL, LRP1 e proteína 9 de ligação a RAN (RANBP9), que se liga e internaliza ACs infectados com HSV-1 de uma maneira que leva a apresentação cruzada de antígenos virais derivados de AC para Células T CD8 + 127 (Fig. 3d). AXL foi necessária para a ligação AC, LRP1 promoveu a internalização AC por meio de sua interação com o adaptador RAC GTP GULP1 e RANBP9 facilitou a interação funcional entre AXL e LRP1. O direcionamento genético de qualquer uma dessas moléculas em DCs em camundongos infectados com HSV-1 leva ao acúmulo de ACs infectados, ativação prejudicada do baço Células T CD8 + dirigidas contra o antígeno HSV-1, aumentadas carga viral e diminuição da sobrevivência de camundongos127. Como estes Nocautes de gene direcionados a DC não afetam a infectividade do HSV-1 em si, os dados fornecem genética molecular direta evidência de causalidade ligando eferocitose DC de infectados ACs com apresentação cruzada de antígeno e adaptativa imunidade em camundongos infectados com patógenos.